Методика микробиологического исследования анаэробной микрофлоры кишечника

Несмотря на значительный прогресс в изучении качественного и количественного состава микрофлоры, остается много спорных вопросов, связанных не только с диагностикой, но и с лечением дисбактериоза дисбиоза кишечника. Nissle в г. Более полное определение дисбактериоза дал российский микробиолог Л. Изучение роли микробиоты в жизнедеятельности человека привело ученого-биолога И.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения проблем со здоровьем, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему - начните с программы похудания. Это быстро, недорого и очень эффективно!


Узнать детали

Дисбактериоз кишечника

Представлены собственные исследования характера микрофлоры кишечника по содержанию Ig-расщепляющей протеолитической активности фекалий у детей с хронической гастродуоденальной патологией. It is shown that the method may be useful for the characterization of intestinal microbiota. В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что изменение количественного и качественного состава микрофлоры кишечника практически всегда сопровождает любое неблагополучие в пищеварительной системе.

Не отвечая критериям самостоятельной нозологической единицы, дисбактериоз кишечника является как следствием, так и одним из звеньев патогенеза патологии желудочно-кишечного тракта. С одной стороны, дисбактериоз кишечника всегда вторичен, поскольку возникает при любом изменении внутренней среды кишки вследствие действия патогенных факторов или прямого влияния на кишечную микрофлору. С другой стороны, дисбактериоз кишечника сам может приводить к повреждению кишечного эпителия, тем самым нарушая процессы пищеварения и усугубляя клиническое течение заболеваний желудочно-кишечного тракта.

В настоящей статье мы коснемся преимущественно диагностики нарушений микроэкологии толстого кишечника. Толстая кишка представляет собой биотоп с высокой степенью обсемененности. В ней обнаружено более видов микроорганизмов. Необходимо отметить одну особенность микрофлоры толстого кишечника — по мере продвижения от проксимальных отделов к дистальным увеличивается ее обсемененность. В проксимальном отделе общее число микроорганизмов составляет 10 8 9 , а в прямой кишке — 10 11 12 в 1 г кала.

Нормальная микрофлора кишечника колонизирует как просвет кишечного тракта, так и поверхность слизистой оболочки кишки, формируя при этом пристеночную или мукозную микрофлору М-микрофлора и полостную микрофлору П-микрофлора. Основную защитную функцию выполняет мукозная микрофлора [1, 2, 3, 4].

Бактериологический анализ определение состава фекальной микрофлоры, отражающей микробный состав лишь дистальных отделов кишечника — наиболее доступный метод, однако недостаточно точный.

Биохимический экспресс — метод определения протеолитической активности супернатантов фекалий. Ионная хроматография, определяющая в фекалиях биогенные амины, желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения. В результате многолетнего изучения кишечной микрофлоры Р. Эпштейн-Литвак и Ф. Вильшанская разработали методы лабораторной диагностики дисбактериоза, основанные на бактериологическом исследовании кала. Эти методы до сих пор существуют практически в неизмененном виде и широко применяются.

Но у данного метода есть недостатки. Бактериологическое исследование кала отражает микробный состав полостной флоры лишь дистальных отделов кишечника. Обычно метод предоставляет информацию о видах микробов. В тени остается около видов анаэробов и состав тонкокишечной микрофлоры.

Невозможно идентифицировать бактериологическим методом простейших, грибы и вирусы. К тому же данный метод не дает качественной характеристики микробиоценоза.

Хочется отметить, чтобы выделить всеми доступными современной медицине методами все возможные виды микрофлоры и составить их развернутую бактериологическую характеристику, потребовалось бы не менее одного года [5, 6]. В литературе также имеются сообщения, подтверждающие низкую диагностическую ценность исследования кала на дисбактериоз [7]. Ниже приведена классификация дисбактериоза кишечника, предложенная И. Куваевой и К. Ладодо в году [8]. Данная классификация базируется на данных бактериологического исследования кала и клинической симптоматике, которая, как правило, неспецифична.

Классификация дисбактериоза кишечника по И. Ладодо Несмотря на введение в микробиологическую практику новых усовершенствованных методов исследования, до сих пор четкой границы между микробиоценозом кала здоровых и больных лиц так и не выявлено. Каловый микробиоценоз является сложным и динамичным. Состав и количество бактерий широко варьируют. Количественный анализ бактериального состава и интенсивности свечения в центральных участках образца фекалий, на поверхности и в слизи позволили различить особенности биологической структуры кала здоровых и больных.

Особенностью данных исследований является то, что исследуются не гомогенизированные образцы, а цилиндрические образцы кала, полученные от больных, так как при гомогенизации бактерии равномерно распределяются в образце, чего не бывает в естественных условиях [9].

Существуют и другие методы диагностики дисбактериоза кишечника, основанные на определении метаболитов кишечной микрофлоры [2]. Эти соединения разделены на 4 группы.

В первую группу входят индикан, n-крезол, фенол. Индикан расщепляется индол-положительными микробами, n-крезол, фенол — анаэробными и аэробными микроорганизмами. Это метаболиты строгих анаэробов. Третью группу составляют деконъюгированные желчные кислоты — метаболиты бактероидов, бифидобактерий, клостридий, стрептококков и энтеробактерий.

Аммиак входит в четвертую группу, является метаболитом грамположительных и грамотрицательных анаэробов, энтеробактерий и стрептококков. Для определения метаболитов кишечной микрофлоры используются такие методы, как газо-жидкостная, высокоэффективная жидкостная хроматография, к сожалению, не всегда доступные в повседневной клинической практике. В настоящее время идентифицирован ряд факторов кишечной микрофлоры, обеспечивающих персистенцию и колонизацию симбионтной и условно-патогенной микрофлоры.

К таким факторам относятся ферменты, которые формируют устойчивость некоторых представителей кишечной микрофлоры к действию секреторных антител [10]. Накоплены данные о том, что ферменты, способные расщеплять секреторные иммуноглобулины слизистых оболочек, способствуют колонизации эпителия патогенными бактериями. В связи с этими фактами в последнее время были предложены и апробированы скрининговые биохимические методы оценки состояния микробиоценоза кишечника по уровню протеолитической, Ig-расщепляющей активности супернатантов фекалий [6, 11, 12].

Эти методы диагностики дисбиоза основаны на том, что различные таксономические виды бактерий, колонизирующие разные отделы кишечника, обладают неодинаковой протеолитической способностью.

Как правило, индигенная микрофлора кишечника человека и его фекалий, в частности бифидо- и лактофлора, обладает выраженной сахаралитической, нежели протеолитической активностью. Возрастание суммарной протеолитической активности супернатантов фекалий тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника.

IgА-протеазы — секретируемые факторы бактериальной природы. Они представляют собой специфические энзимы, расщепляющие IgА на классические Fab- и Fc-фрагменты, лишая его тем самым антительных свойств [10]. Протеолитическая активность, в том числе иммуноглобулин-расщепляющая активность, выявлена у многих видов патогенных и условно-патогенных бактерий, грибов и простейших, способных колонизировать кишечник. Выделены IgA-протеиназы у представителей семейства энтеробактерий: Proteus spp, Serratia marcescens, Klebsiella ozaenae, Klebsiella pneumonie, E.

Coli, Shigella spp. Грамположительная кокковая микрофлора кишечника — S. IgA-протеиназы индуцируют грибы рода Candida. Изучены протеолитические ферменты, являющиеся факторами вирулентности, у таких простейших, как Lamblia intestinalis [14]. Некоторые представители фекальной микрофлоры здоровых людей: Streptococcus faecalis, Staphyloccocus spp.

Propionibacterium acnes, Cl. Bifidobacterium spp. Вероятно, эта способность вносит свой вклад в вирулентность нормальной микрофлоры, которая, как известно, появляется при дисбактериозе кишечника наряду со снижением антагонистических свойств. Способность продуцировать IgА протеиназы характерна в основном для патогенных микроорганизмов и является тем условием, которое обеспечивает существование микробов на слизистых поверхностях [10].

Патогенность микробных протеиназ обусловлена не только их деградирующей активностью в отношении антител, но и способностью непосредственно повреждать эпителиальные клетки слизистых оболочек и активировать гемокоагуляционные механизмы в очаге воспаления [15, 16, 17]. Некоторые из бактериальных протеиназ способны снижать жизнеспособность энтероцитов кишечника и повреждать защитный барьер слизистых [18, 19].

Протеолитическая активность исследовалась при патологических состояниях. Так, изучен протеолитический потенциал фекалий при колитах, болезни Крона, в детском возрасте — при кишечной инфекции и дисбактериозах [11, 12, 20, 21, 22, 23]. Было показано, что положительные протеолитические казеинолитические пробы, причем высокой степени активности, чаще выявлялись в группе детей с превалирующим выделением различных видов условно-патогенных бактерий и выраженными изменениями микроэкологии кишечника [11].

Протеолитическая активность фекалий нарастала с увеличением содержания в фекалиях гемолитических E. Coli, бактерий рода Proteus, Staphyloccocus и их ассоциаций с псевдоманадами, клебсиеллами, серрациями, гафниями и грибами рода Candida. Особый интерес представляет исследование, в котором изучалась Ig-расщепляющая активность микрофлоры кишечника по профилю протеиназ в норме и при патологических состояниях [12]. Выявлено, что условно-патогенная микрофлора обладает более выраженным агрессивным потенциалом, обусловленным Ig-протеолитической активностью по сравнению с бифидофлорой.

Уровень иммуноглобулин — расщепляющей активности фекалий у детей с нарушениями микроэкологии кишечника — был выше, чем у детей с эубиозом. Таким образом, методы, позволяющие оценить уровень протеолитической активности фекалий, косвенно характеризуют возникающий дисбаланс в составе не только фекальной, но и пристеночной тонко- и толстокишечной микрофлоры, показывают ее качественные изменения.

В доступной литературе мы не нашли данных об использовании данного метода у детей с хронической гастродуоденальной патологией. М ы применили высокочувствительный способ определения общей протеолитической, иммуноглобулин-расщепляющей активности копрофильтратов детей с хронической гастродуоденальной патологией на основе твердофазного иммуноферментного анализа [12]. Используя его, можно с высокой чувствительностью определять активность протеиназ с таким типом активных центров, как сериновые, металлозависимые и аспартатные тиоловые путем введения обратимых, необратимых ингибиторов и изменением рН реакционной среды до кислых значений.

Нами проведено исследование Ig-расщепляющей протеолитической активности фекалий у детей с хронической гастродуоденальной патологией. Для изучения активности протеиназ, дети были разделены на 3 группы. Первую группу 55 больных составили дети с неэрозивными гастродуоденитами, вторую группу 31 больной — больные эрозивными гастродуоденитами, третью — дети с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки 33 человека.

Результаты представлены в таблице 2. Активность протеолитических ферментов у детей с гастродуоденальной патологией. Нами выявлено, что показатели 1-й группы детей статистически значимо отличаются от 2-й и 3-й групп по общей протеолитической активности и активности тиоловых ферментов. Также необходимо отметить, что ферменты тиолового типа вносят наибольший вклад в протеолитическую активность фекалий. Таким образом, нами установлено повышение общей протеолитической активности копрофильтратов по мере прогрессирования гастродуоденальной патологии от неэрозивных форм к эрозивно-язвенным поражениям.

На наш взгляд, в плане диагностики дисбиоза кишечника изучение иммуноглобулин-расщепляющей активности микрофлоры представляется перспективным направлением, так как способность продуцировать данные ферменты считается фактором патогенности и может служить качественной характеристикой кишечной микробиоты. Булатов, А.

Камалова, Э. Удачина, О. Зинкевич, Н. Сафина, А. Урсова Н. Современные технологии в коррекции дисбактериозов кишечника у детей. Минушкин О. Казначеева Л.

Клинические аспекты дисбактериоза кишечника

Нормальная микрофлора человека, в том числе и кишечная, с ее специфическими функциями - защитной, обменной, иммуномодулирующей, пищеварительной, синтетической определяет микробную экологию пищеварительного тракта и участвует в поддержании гомеостаза макроорганизма [11]. Микрофлора кишечника подразделяется на две части: облигатную микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и факультативную бактерии, часто встречающиеся у здоровых людей, но являющиеся условно-патогенными, которые могут стать причиной заболеваний в случае снижения резистентности макроорганизма [3,10]. В настоящее время наиболее распространенным методом лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника является бактериологическое исследование кала пациента классический метод. С его помощью удается оценить достаточно широкий спектр представителей условно-патогенной флоры, выявить дефицит бифидо-и лактобактерий. Необходимо отметить, что кишечная микрофлора подвержена колебаниям в зависимости как от эндогенных факторов нервный статус, пища, температура тела и т.

Дисбактериоз кишечника может возникать при воздействии на организм широкого круга неблагоприятных факторов, в том числе приёма медикаментов, нарушения в питании, стрессов, заболеваний внутренних органов, последствий при инфекциях ЖКТ, снижения иммунитета, нарушения биоритмов и т. Особенно часто нарушение микрофлоры кишечника является следствием длительного и возможно некорректного применения антибактериальных препаратов, а также иммунодепрессантов и цитостатиков. В целях исследования пациент отбирает образец кала непосредственно при естественной дефекации. Особенности сбора, хранения и доставки биоматериала изложены в инструкции, которую пациент предварительно получает вместе со стерильным контейнером. Наиболее информативным методом исследования кала на состав микрофлоры является культуральный метод.

Для того, чтобы узнать, как сдавать анализы, нажмите курсором на иконку в графе "Как сдавать" напротив необходимого анализа. Отдельно оплачиваются Забор крови из вены Взятия материала для исследования нос, зев, глаза, ухо, Взятие материала для исследования урогинекологический По оценкам Минздрава РФ за г. Эти смертельные заболевания развиваются по многим причинам, одной из которых является сахарный диабет. Сахарный диабет бывает врожденный и приобретенный. Развитие приобретенного сахарного диабета начинается с неправильного питания и прочих синдромов, которые объединяются под термином дисбиоз. Причиной масштабного распространения дисбиозов признано неправильное питание, стрессы, агрессивное влияние окружающей среды, нерациональное использование антибиотиков и гормонов как для лечения, так и в промышленном производстве мяса говядины и птицы. Для поиска причины дисбиоза врачи назначают дополнительные исследования, как правило, это копрологический анализ и прочие исследования в зависимости от диагноза. Для того чтобы составить полное представление о причинах и степени дисбактериоза мы предлагаем комплексный анализ микрофлоры кишечника. Определение концентрации летучих жирных кислот сравнительно недавно стало применяться для характеристики микробных взаимоотношений в кишечнике.

По всем вопросам, связанным с COVID , включая заявки на выполнение тестирования, обращайтесь по телефону.

.

.

.

ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Общая микробиология (Бадлеева М.В.) - 5 лекция

Комментариев: 5

  1. Файруза:

    И наверное многие заметили “врачи” какого “народа” занимаются трансплантологией в “горячих точках” планеты. Правильно! Израиля!!!)))

  2. Patria:

    Irina, Вы постоянно путаете ситуации, то мешая их в одну кучу, то пытаетесь перевести тему в совершенно другое русло! Вы мне напоминаете антироссийскую компанию Зарадных СМИ! Попытались с одной стороны.., уличили во лжи. Зашли с другой, та же история! И так до бесконечности, вдруг где-нибудь сработает! Мы были плохие в Крыму, Сирии, на Евровидении, FIFA то мы купили, Ходорковского ни за что посадили, Савченко обидели, Немцова убили!!! И вдруг, Ураааа, появилась мразь которая очернила весь российский спорт! И началось и поехали! И плевать всем на Украину , вместе с Немцовым! Новая тема куда интереснее!!! Так и Вы! Несёте яркую ересь, постоянно поттасовывая факты, а когда Вам задают встречные вопросы, Вы делаете вид, что их не замечаете!. Я же на каждые выпады отвечаю в формате: вопрос-ответ!)))Хотелось бы и от Вас подобного действа, а не скать с темы на тему, приводя всё новые и новые примеры, не имеющие никакого отношения к теме! Я также задавал встречный вопрос: а тмеет ли право женщина применять физическую силу( ударить) мужчину??? Женщины, как воды в рот набрали, наперебой обсуждая мужа тирана! У Вас двойные стандарты, а посему мужчины выбирает то, ближе ему, а не Вашим фантазиям!

  3. Balyk:

    Я привыкла к комплиментам с детства, меня украсть хотели, и выкупить у матери, так, что у меня хорошая самооценка, но без самолюбования.

  4. gulia_unique:

    Victor, рабо́тает нажми у себя

  5. Зинаида, а ещё вы должны знать у себя группу крови и гинетические болезни по материнской линии. Спасибо!